細(xì)胞培養(yǎng)做為生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)之一，可以說(shuō)是滲透科研界的方方面面。那么細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的常見問題有哪些？應(yīng)該如何解決呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、如何選用細(xì)胞系培養(yǎng)基？

優(yōu)先根據(jù)細(xì)胞來(lái)源公司提供的培養(yǎng)條件，。一般建議不要隨意更換培養(yǎng)基種類。細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用與原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，可能造成細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化或無(wú)法存活，以及細(xì)胞的表型功能丟失。

二、細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？

直接丟棄或更換，將未受污染的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至其它培養(yǎng)箱，并用消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)以及二氧化碳培養(yǎng)箱。如發(fā)生真菌霉菌污染，需用紫外燈照射整個(gè)細(xì)胞間，從而消除可能產(chǎn)生的孢子。同時(shí)排除使用試劑的污染，包括培養(yǎng)基和血清，可以空培試驗(yàn)。

三、為何培養(yǎng)基用一段時(shí)間后，顏色偏紫？

培養(yǎng)基隨著多次開蓋會(huì)使培養(yǎng)液 CO2 逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性從而變紫，尤其是剩余的培養(yǎng)基越少越容易變紫。可將培養(yǎng)瓶瓶蓋旋松放入二氧化碳培養(yǎng)箱校正溶液 PH 值，過(guò)一段時(shí)間就會(huì)變回正常。變紫的培養(yǎng)基是可以繼續(xù)使用的，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)在培養(yǎng)箱會(huì)自動(dòng)恢復(fù)顏色。

四、細(xì)胞培養(yǎng)液變黃變渾，如何處理？

細(xì)胞培養(yǎng)液變黃多半是細(xì)胞密度過(guò)大，細(xì)胞增殖速度過(guò)快，產(chǎn)生大量酸性代謝廢物，導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足。而培養(yǎng)液變渾多半是發(fā)生了細(xì)菌污染。出現(xiàn)這種情況應(yīng)立即進(jìn)行消化傳代處理。

五、血清中出現(xiàn)的沉淀是什么，有影響嗎？

① 纖維蛋白，是經(jīng)常出現(xiàn)的較大沉淀物，可達(dá)到 1～2 mm，用肉眼可觀察到；

② 膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)，是血清出現(xiàn)沉淀物的常見原因；

③ 磷酸鈣，也是一種常見沉淀物，通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁，并且在 37 ℃ 培養(yǎng)時(shí)會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。

這些沉淀對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)是沒有影響的，如想去除沉淀，盡量采用離心方法，不建議使用過(guò)濾方法，因?yàn)闀?huì)堵塞濾膜而且會(huì)造成污染的風(fēng)險(xiǎn)。

六、細(xì)胞支原體污染如何處理？

支原體污染是比較難去除的，特別容易復(fù)發(fā)，一般建議直接更換新的細(xì)胞，如特別精貴或重要的細(xì)胞可嘗試使用四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素（泰樂霉素）、喹諾酮類抗生素。

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