實驗中的抗體應(yīng)用問題和解決方案

更新時間：2024-05-16

點擊次數(shù)：1777

抗體是一種由漿細胞（效應(yīng)B細胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個特征，該外來目標被稱為抗原。
1. 做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?
不一定能通用。流式是用直接標記還是間接標記?如果是直接標記的話，那這個抗體一般不是FITC標記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標記的抗體來直接標記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用其它的標記的話，或者是間接標記的話，就有麻煩，因為熒光素的標記很可能會影響二抗和一抗的結(jié)合。
2. 為什么我的抗體做WB非常好，而做不了IF，IHC等其他任何實驗?
首先恭喜你有一個WB非常好的抗體，畢竟能獲得做WB非常好的抗體也不容易。其次，你這個抗體很可能是通過人工合成多肽得到的，和上面所述，你用來做抗原的多肽恰好被包埋在蛋白質(zhì)的中心，因此只能識別WB中線性的部分。
3. 如何選擇免疫組化抗體?
首先，一抗是選擇單克隆抗體還是多克隆抗體，單克隆抗體特異性強，靈敏度低;多克隆抗體靈敏度高，特異性弱。根據(jù)你的實驗結(jié)果，如果非特異多，那么選擇單克隆抗體;如果陽性信號弱，不妨選擇多克隆抗體試試。一般家兔來源的都是多克隆，小鼠來源的是單克隆。其次是要弄明白該一抗能夠識別什么種屬的抗原，抗體說明書上面一般注明有，比如小鼠Mus, 大鼠Rat, 人Hum。

再次比較重要的是要注意一抗的來源。比如我們在人的癌組織中做p53的免疫組化，一抗我們采用的是小鼠來源的p53抗體，那么二抗我們一定要選擇抗小鼠的二抗比如(山羊抗小鼠，兔抗小鼠)，這一點非常重要。最后，一般的抗體說明書都會注明能做什么實驗，如果標明了不可以做免疫組化，一定不要選擇;反過來說，即使標明了可以做免疫組化，也不一定能夠做，商家只會夸大其效果。
4. WB和IF的二抗是一樣的嗎?
很明顯，不是!免疫熒光抗體是用于免疫熒光試驗的，是用FITC或PE等標記的抗體，結(jié)果需要紫外線激發(fā)并用熒光顯微鏡觀察WB抗體一般是HRP或堿性磷酸酶等標記的抗體，需顯色底物(如OPDTMB等)直接顯色(肉眼)或化學(xué)發(fā)光法顯影(需特殊儀器)。
5. 做CHIP的抗體是否可以用來做WB抗體?
不一定，一般來說做CHIP級別的抗體對抗體純度特異性方面都要求比較高，基本上能做CHIP的抗體都可以做WB。但是如果CHIP的抗體識別的是構(gòu)象表位(比如是由兩個實際靠在一起但變?yōu)榫€性結(jié)構(gòu)之后相隔很遠的兩端序列)，而不是線性表位，這種CHIP抗體做不了WB。
6. 抗體說明書上面沒有寫該抗體能夠用于某項實驗怎么辦?
一般而言，抗體研發(fā)出來之后都要經(jīng)過WB，IP，IF，IHC實驗。檔發(fā)現(xiàn)濃度不夠做IF，IHC時候，國外的抗體一般都是寫未檢測，國內(nèi)的抗體一般是不寫。所以盡量不要抱著試試的心里去嘗試，往往只會浪費時間。你想啊，如果抗體能夠做該實驗，他們肯定會寫上去啊。
7. 做ELISA的抗體能否用來做WB?
通常用WB抗體稀釋濃度為1:1000，IF/IHC為1:100，而如果可以做ELISA則可以稀釋1:10000。如果一個抗體用來做ELISA的，那么言外之意就是該抗體效價不高。但不是說ELISA的抗體不能用于做WB，抗體說明書提示做ELISA稀釋比例為1:1000，那么你可以試試1:100做做WB。
通常用WB抗體稀釋濃度為1:1000，IF/IHC為1:100，而如果可以做ELISA則可以稀釋1:10000。如果一個抗體用來做ELISA的，那么言外之意就是該抗體效價不高。但不是說ELISA的抗體不能用于做WB，抗體說明書提示做ELISA稀釋比例為1:1000，那么你可以試試1:100做做WB。